不得了，油茶根中“生出”1个新的三萜皂苷！

　　摘要：目的研究油茶Camellia oleifera根的化学成分。方法利用硅胶、ODS、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱、高效制备液相色谱等色谱方法进行分离纯化，根据理化常数测定及谱学数据分析鉴定化合物结构。结果从油茶根中分离得到3个化合物，分别鉴定为3-O-β-D-半乳糖基-(1→2)-[β-D-木糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-葡萄糖醛酸基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基-21-O-乙酰氧基-22-O-当归酰氧基齐墩果醇-12-烯（1）、大头茶苷J（2）、山茶皂苷B1（3）。结论化合物1为新化合物，命名为山茶皂苷Ac，化合物2和3为首次从油茶中分离得到。

　　油茶Camellia oleifera Abel.为山茶科山茶属植物，主要分布于热带及亚热带地区，产于我国的西南部和东南部，遍布江西、湖南、福建等17个省区[1]，同时油茶也是我国基本的木本食用油料树种。油茶药用部位主要有茶子心、茶油、茶子饼、油茶根皮、油茶叶等，其中茶油已被《中国药典》2015年版收载[2]。现有研究表明油茶主要含皂苷、黄酮及鞣质等类成分，具有多种药理活性，包括抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗突变等[3-9]，其中油茶皂苷抗肿瘤药理活性比较显著[7-9]。为寻找其抗肿瘤有效成分，阐明其药效物质基础，更好地开发利用该植物资源，在本课题组前期对油茶茎和油茶枯饼研究基础上[10-14]，利用各种色谱技术从油茶根95%乙醇提取物正丁醇部位中分离鉴定了3个化合物，分别为3-O-β-D-半乳糖基-(1→2)-[β-D-木糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-葡萄糖醛酸基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基-21-O-乙酰氧基-22-O-当归酰氧基齐墩果醇-12-烯（3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→2)-[β-D-xylopyra-nosyl-(1→3)-α-L-arabinopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucuronopyranosyl-3β,15α,16α,21β,22α,28-hexahydr-oxy-21-O-acetyl-22-O-angeloyloxyolean-12-ene，1）、大头茶苷J（gordonoside J，2）、山茶皂苷B1（camelliasaponin B1，3）。其中化合物1为新化合物，命名为山茶皂苷Ac，化合物2和3为首次从油茶根中分离得到。

　　1仪器与材料

　　Aglient Technologies1260液相色谱仪、安捷伦1200型制备液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；Buchi中压液相制备色谱仪（瑞士步琪公司）；Sartorius BP211D型电子天平（德国赛多利斯集团）；UV-260紫外分光光度计（日本岛津公司）；RY-1G熔点测定仪（中国天津天光光学仪器有限公司）；Autopol IV-T/V旋光仪（美国DKSH公司）；Varian UNITY INOVA 500超导核磁共振仪（美国Varian公司）；Micromass ZabSpec质谱仪（美国Micromass公司）；Waters ACQUITY UPLC/Xevo G2 QTOF高分辨质谱仪（美国Waters公司）；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20（瑞典Amersham Biosciences公司）；C18反相填料为日本YMC产品，制备色谱柱为YMC（250 mm×20 mm，10μm）；D101大孔树脂为安徽三星树脂科技有限公司产品；柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产，水为娃哈哈水，氘代吡啶为美国剑桥公司（CIL）产品，其他所用试剂均为分析纯。

　　药材采自江西广丰，经江西省药品检验检测研究院袁桂平主任中药师鉴定为山茶科山茶属植物油茶Camellia oleifera Abel.的根。标本（20170519）保存在江西省药品检验检测研究院中药标本室。

　　2提取与分离

　　油茶干燥根10.3 kg，粉碎，用4倍量的95%乙醇回流提取3次，每次2 h，提取液浓缩至适量。依次用醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取。萃取液分别减压浓缩至干，得醋酸乙酯部分（40.5 g）和正丁醇部分（90.7 g）。将正丁醇部分经过D101大孔树脂柱，依次用水及30%、50%、70%、95%乙醇洗脱，得70%乙醇洗脱部分（12.2 g），经正相硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇（7∶3→6∶4）系统梯度洗脱，经薄层色谱检视，合并相近的组分，得12个组分Fr.1～12。Fr.9（2.4 g）再经过常压反相（ODS）柱色谱，以乙腈-水（20∶80→50∶50）系统进行梯度洗脱，经高效液相色谱检测后，合并相同组分，得到10个流分Fr.9-1～9-10。Fr.9-5（33.2 mg）经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.05%三氟乙酸（37∶63，7 mL/min）为流动相，得到化合物1（9.4 mg，tR＝92.6 min）。Fr.9-6（29.5 mg）经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.05%三氟乙酸（36∶64，7 mL/min）为流动相，得到化合物2（11.3 mg，tR＝83.7 min）和3（12.0 mg，tR＝97.3 min）。

　　3结构鉴定

　　化合物1：白色粉末。mp 244～245℃；[α]20D?13.2°(c 0.08,MeOH)，硫酸-乙醇显紫红色斑点，Libermann-Burchard反应呈现红色，表明为三萜皂苷类化合物。UV显示该化合物在甲醇溶液中的最大吸收为206 nm和252 nm。HR-ESI-MS质谱给出准分子离子峰m/z:1 255.569 3[M＋Na]+（计算值为1 255.571 8），分子式为C58H92O27。酸水解及衍生化气相分析检出D-葡萄糖醛酸、D-木糖、L-阿拉伯糖和D-半乳糖。

　　1H-NMR谱显示三萜类特征的7个角甲基信号δH1.83,1.28,1.24,1.10,1.06,0.98和0.80(各3H,s)；1个三取代的双键信号δH 5.48(1H,brs,H-12)；1组羟甲基质子信号δH 3.74(1H,d,J=12.0 Hz)和3.48(1H,d,J=12.0 Hz)；5个连氧次甲基质子信号：δH 3.25(1H,dd,J=11.5,5.0 Hz)，4.30(1H,m),4.35(1H,m),6.27(1H,d,J=10.0 Hz),6.56(1H,d,J=10.0 Hz)；1组当归酰氧基特征氢信号δH5.80(1H,q,J=7.0 Hz),2.08(3H,d,J=7.0 Hz)和1.98(3H,s)；1个乙酰氧基的甲基质子信号：δH 2.12(3H,s)；此外，1H-NMR谱还给出了4个糖的端基质子信号：δH 5.83(1H,d,J=7.5 Hz),5.73(1H,d,J=6.0 Hz),5.02(1H,d,J=7.5 Hz)和4.92(1H,d,J=7.0 Hz)，以及在δH 4.01～4.55归属于糖的连氧次甲基和连氧亚甲基的部分重叠氢信号。根据端基氢相对较大的3JH-1,H-2偶合常数值表明葡萄糖醛酸基、半乳糖基和木糖基的端基碳构型为β型，阿拉伯糖基的端基碳构型为α型。13C-NMR谱显示58个碳信号，其中，2个烯碳信号δC123.8和143.6；4个糖端基碳信号δC106.7,105.2,103.4,101.7。以上数据表明化合物1为齐墩果-12-烯四糖衍生物，具有β-D-葡萄糖醛酸基、β-D-半乳糖基、β-D-木糖基、α-L-阿拉伯糖基、1个当归酰氧基取代基以及1个乙酰氧基。将化合物1核磁数据与文献报道的大头茶皂苷I（gordonsaponinI）[15]进行比较，两者数据基本相似，区别在于大头茶皂苷I中葡萄糖基在结构1中被木糖基取代。

　　在HMBC中（图1），H-21(δH 6.56)和H-22(δH 6.27)分别和羰基碳(δC170.8)和羰基碳(δC 168.1)相关，表明乙酰氧基和当归酰氧基分别连接在母核的C-21位和C-22位，另外，葡萄糖醛酸基的端基氢信号H-1(δH 4.92)与苷元C-3(δC89.5)远程相关证明β-D-葡萄糖醛酸基单元连接在母核的C-3位，阿拉伯糖基的端基氢信号H-1(δH 5.73)与葡萄糖醛酸基的C-3(δC 83.6)信号有远程相关，表明L-阿拉伯糖基单元连接在D-葡萄糖醛酸基的C-3位，木糖基的H-1(δH 5.02)与阿拉伯糖基的C-2(δC 81.9)远程相关，表明D-木糖基单元连接在L-阿拉伯糖基的C-2位，半乳糖基的端基氢信号H-1(δH 5.83)与葡萄糖醛酸基的C-2(δC 79.1)远程相关，表明D-半乳糖基单元连接在D-葡萄糖醛酸基的C-2位。

　　在NOESY谱中，观察到H-3/H-23、H-16/H-28、H-18/H-15、H-21/H-29、H-22/H-30相关，说明C-3位和C-21位羟基为β构型，C-15位、C-16位和C-22位羟基为α构型。综上所述，化合物1结构鉴定为3-O-β-D-半乳糖基-(1→2)-[β-D-木糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-葡萄糖醛酸基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基-21-O-乙酰氧基-22-O-当归酰氧基齐墩果醇-12-烯，结构见图1。具体核磁数据见表1。

　　化合物2：白色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z:1 197.8[M＋Na]+。1H-NMR(500 MHz,C5D5N)δ:6.13(1H,dd,J=11.5,4.5 Hz,H-22),5.83(1H,q,J=7.0 Hz,Ang-H-3),5.76(1H,d,J=7.0 Hz,Gal-H-1),5.72(1H,d,J=7.5 Hz,Ara-H-1),5.44(1H,brs,H-12),5.04(1H,d,J=7.0 Hz,Xyl-H-1),4.92(1H,d,J=7.5 Hz,GlcA-H-1),4.46(1H,brs,H-16),3.70(1H,d,J=12.0 Hz,H-28a),3.64(1H,d,J=12.0 Hz,H-28b),3.22(1H,dd,J=11.0,4.0 Hz,H-3),2.02(1H,d,J=7.0 Hz,Ang-H-4),1.87(3H,s,H-27),1.81(3H,s,Ang-H-5),1.28(3H,s,H-30),1.25(3H,s,H-23),1.08(3H,s,H-24),1.03(3H,s,H-29),0.99(3H,s,H-26),0.77(3H,s,H-25)；13C-NMR(125 MHz,C5D5N)苷元δ:38.8(C-1),26.5(C-2),89.5(C-3),39.4(C-4),55.4(C-5),18.7(C-6),36.6(C-7),41.4(C-8),47.0(C-9),36.8(C-10),23.8(C-11),123.1(C-12),144.4(C-13),47.6(C-14),67.3(C-15),74.9(C-16),45.1(C-17),41.6(C-18),46.9(C-19),32.0(C-20),41.4(C-21),72.6(C-22),27.8(C-23),16.8(C-24),15.7(C-25),17.4(C-26),21.2(C-27),62.9(C-28),33.4(C-29),24.8(C-30)；当归酰氧基δ:167.8(C-1),129.2(C-2),136.4(C-3),15.7(C-4),20.8(C-5)；糖基：GlcAδ:105.5(C-1),79.1(C-2),83.4(C-3),71.0(C-4),77.2(C-5),172.1(C-6)；Araδ:101.7(C-1),81.7(C-2),73.4(C-3),68.4(C-4),65.6(C-5)；Galδ:103.4(C-1),73.6(C-2),74.8(C-3),70.0(C-4),76.3(C-5),61.7(C-6)；Xylδ:106.5(C-1),75.5(C-2),78.0(C-3),70.6(C-4),67.4(C-5)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物2为大头茶苷J。

　　化合物3：白色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z:1 187.8[M－H]?。1H-NMR(500 MHz,C5D5N)δ:9.94(1H,brs,H-23),6.18(1H,d,J=7.2 Hz,H-22),5.99(1H,q,J=7.0 Hz,Ang-H-3),5.74(1H,d,J=7.0 Hz,Gal-H-1),5.76(1H,d,J=7.8 Hz,Ara-H-1),5.36(1H,brs,H-12),5.02(1H,d,J=7.5 Hz,Glc-H-1),4.82(1H,d,J=7.5 Hz,GlcA-H-1),3.67(1H,d,J=10.5 Hz,H-28a),3.53(1H,d,J=10.5 Hz,H-28b),3.20(1H,dd,J=11.5,5.0Hz,H-3),2.08(1H,d,J=7.0 Hz,Ang-H-4),1.93,1.86,1.22,1.10,1.06,1.02,0.79(3H×7,s,-CH3)；13C-NMR(125 MHz,C5D5N)苷元δ:38.6(C-1),26.4(C-2),84.5(C-3),55.6(C-4),49.5(C-5),18.3(C-6),33.0(C-7),40.0(C-8),46.8(C-9),36.7(C-10),23.7(C-11),123.3(C-12),143.6(C-13),41.5(C-14),35.0(C-15),70.1(C-16),44.6(C-17),40.7(C-18),47.4(C-19),32.0(C-20),41.6(C-21),72.9(C-22),211.3(C-23),16.6(C-24),15.5(C-25),16.8(C-26),27.4(C-27),63.7(C-28),33.4(C-29),25.1(C-30)；当归酰氧基δ:167.8(C-1),129.4(C-2),136.5(C-3),15.8(C-4),20.9(C-5)；糖基：GlcAδ:105.5(C-1),78.6(C-2),84.4(C-3),71.0(C-4),77.3(C-5),172.0(C-6)；Araδ:101.7(C-1),81.6(C-2),73.5(C-3),67.4(C-4),65.6(C-5)；Glcδ:107.5(C-1),76.3(C-2),77.3(C-3),72.7(C-4),78.3(C-5),63.5(C-6)；Galδ:102.3(C-1),73.7(C-2),74.9(C-3),70.4(C-4),76.7(C-5),61.7(C-6)。以上数据与文献报道的一致[17]，故鉴定化合物3为山茶皂苷B1。